金免疫技术综述
前言
金免疫技术是一种以胶体金作为标记物的免疫标记技术，是继放射标记、酶标记、荧光标记技术应用以来的一种新检验技术，于1971年由Faulk和Taylor始创，将胶体金与抗体结合，最初用于免疫电镜技术，后来陆续建立了间接免疫金染色法、光镜水平的免疫进染色、免疫金银染色等方法。目前，金免疫技术还应用于金免疫测定中，由于金标记常与膜载体配合，形成特定的测定模式，因此典型的如斑点免疫渗滤试验和斑点免疫层析试验等，已是目前应用广泛的简便、快速检验方法。
本综述将简要介绍金免疫技术的发展过程、基本原理、现实应用及其评价以及对此技术未来的展望，以期对金免疫技术能够良好的整体把握。
一．金免疫技术发展过程
早在一个世纪以前，化学家就对胶体金进行了研究，当时只是研究它的结构和金属性质。在1939年Kausche和Ruska把烟草花叶病毒吸附到金颗粒上在电子显微镜下观察见金离子呈高电子密度。然而胶体金技术作为标记物应用于免疫组织化学研究是在1971年，Faulk 和Taylor首先将兔抗沙门氏菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直接免疫细胞化学技术检测沙门氏菌的表面抗原。此后，他们还把胶体金与抗胶原血清、植物血凝素、卵白蛋白、人免疫球蛋白轻链、牛血清白蛋白结合应用。1974年Romano和他的同事们将胶体金属标记在马抗人的IgG上，实现了间接免疫金染色法。1974年Bauer等报道凝集素—金复合物的应用。1978年Geoghe－gan等应用免疫金技术检测B淋巴细胞表面抗原。1981年Danscher建立了用银显影液增强光镜下金颗粒可见性的免疫金银染色法（Immunogold—sliver staining, IGSS）。到了1986年Fritz等人在免疫金银法基础上成功地进行了彩色免疫金银染色，使得结果更加鲜艳夺目。胶体金技术逐渐得到完善和成熟，近１０年来此项技术得到了迅速发展和广泛应用。应用胶体金为标记物的免疫金染色（IGS）与免疫金银染色（IGSS）方法在光镜和电镜下可以单标记和双标记或多种标记同时观察细胞和组织结构，可以定性、定位以至定量研究。
二．金免疫技术基本原理
金免疫技术是一种以胶体金作为标记物的免疫标记技术，胶体金是指金微小粒子(1-100nm)分散在另一种物质中所形成的体系，通常指金微小粒子分散在溶液中所形成的金溶胶，用此金溶胶标记蛋白质(抗原、抗体或 SPA、SPG)，胶体金颗粒具有高电子密度的特性，故在金标蛋白的抗原抗体结合处，显微镜下可见黑褐色颗粒；当这些标记物在相应的标记处大量聚集时，可在载体膜上呈现肉眼可见红色或粉红色斑点，从而用于抗原或抗体物质的定位或定性。
三．金免疫技术应用及评价
金免疫技术方法学主要有金免疫组织化学染色技术和金免疫测定技术，前者包括免疫金（银）光镜染色技术和免疫金电镜染色技术；后者包括斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验等。
金免疫组织化学技术利用免疫的特异性、组织化学的可见性，借助光学显微镜或电子显微镜的显像放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原或抗体，可进行定性、定位、定量研究。金免疫技术的敏感性在标记免疫技术中较低，但应用免疫金（银）光镜染色技术，经银加强染色后，其敏感性增强，可与荧光免疫技术和酶免疫技术相当，因此广泛应用。此外，胶体金在光镜水平还可应用于单克隆抗体或抗血清检测细胞悬液或培养的单层细胞的膜表面抗原，检测培养的单层细胞内抗原，检测阻组织中或亚薄切片中的抗原。在电镜水平还可用于检测细胞悬液或单层培养细胞表面抗原，检测组织超薄切片中的抗原。此方法电镜水平应用比其他免疫电镜方法操作简单，检测速度快，对微细结构的影响也较少，同时还可双重标记或多重标记，但试剂质量要求高，背景非特异吸附干扰大。
金免疫测定技术以醋酸纤维素膜为固相载体，以免疫金为结合物，可肉眼观察判定，灵敏度高、简便、快速，可立等结果，除试剂盒外无需任何仪器设备，试剂稳定性好，其定性作用用于多种临床检测项目，但主要限于检测正常体液中不存在的物质以及正常含量极低而在特殊情况下异常升高的物质，比如HIV、甲胎蛋白、肝炎病毒、禽流感病毒等的检测。随着技术的革新，其应用范围越来越广，在医学临床与基础研究中及工农畜牧业等卫生监测方面都可见到此技术的应用，但目前还只限广泛用于定性或半定量初筛环节。
四．金免疫技术未来的展望
随着社会经济的迅猛发展，在生物、医学以及其他如工农牧林等领域都需要简便、快速、灵敏度高、准确度强以及经济的免疫检测手段，金免疫技术正迎合了这些特点，而且试剂盒的发明使用、批量生产和良好的质量控制都为其广泛应用做好了铺垫，其操作方便性甚至可以让非专业人员熟练应用，虽然目前其在灵敏度和应用范围上还有局限，但通过金免疫技术的不断改进，其应用前景非常乐观，而且代表着快速检测技术发展的一个主要方向，其未来的应用与经济效益大有可为。
参考文献
[1] 刘晓鸣. 浅谈HBsAg全血胶体金检测试纸条在手术急检中应用的体会.丹东医药 2007；3
[2] 黎明兰,徐顺请. 免疫学检验.人民卫生出版社 2006.p.172-180
[3] 吴刚,姜瞻梅,霍贵成. 胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用. 食品工业科技 2007；12:218
[4] 彭大鹏，胡思顺，华艳. 胶体金免疫层析试纸条法与血凝抑制试验、琼脂扩散法检测禽流感病毒抗体的比较.中国兽医学报 2007；7
[5] 赵春艳. 胶体金免疫层析法在乙型肝炎病毒表面抗原检测中的应用评价.实用医技杂志 2009；1：16-1
[6] 胡凤娟. 胶体金法筛查丙型肝炎抗体在街头献血车中的应用检验医学.检验医学 2007；22：4
[7]http://www.med126.com/edu/200712/18329.shtm免疫金技术发展简史
金免疫技术是一种以胶体金作为标记物的免疫标记技术，是继放射标记、酶标记、荧光标记技术应用以来的一种新检验技术，于1971年由Faulk和Taylor始创，将胶体金与抗体结合，最初用于免疫电镜技术，后来陆续建立了间接免疫金染色法、光镜水平的免疫进染色、免疫金银染色等方法。目前，金免疫技术还应用于金免疫测定中，由于金标记常与膜载体配合，形成特定的测定模式，因此典型的如斑点免疫渗滤试验和斑点免疫层析试验等，已是目前应用广泛的简便、快速检验方法。
本综述将简要介绍金免疫技术的发展过程、基本原理、现实应用及其评价以及对此技术未来的展望，以期对金免疫技术能够良好的整体把握。
一．金免疫技术发展过程
早在一个世纪以前，化学家就对胶体金进行了研究，当时只是研究它的结构和金属性质。在1939年Kausche和Ruska把烟草花叶病毒吸附到金颗粒上在电子显微镜下观察见金离子呈高电子密度。然而胶体金技术作为标记物应用于免疫组织化学研究是在1971年，Faulk 和Taylor首先将兔抗沙门氏菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直接免疫细胞化学技术检测沙门氏菌的表面抗原。此后，他们还把胶体金与抗胶原血清、植物血凝素、卵白蛋白、人免疫球蛋白轻链、牛血清白蛋白结合应用。1974年Romano和他的同事们将胶体金属标记在马抗人的IgG上，实现了间接免疫金染色法。1974年Bauer等报道凝集素—金复合物的应用。1978年Geoghe－gan等应用免疫金技术检测B淋巴细胞表面抗原。1981年Danscher建立了用银显影液增强光镜下金颗粒可见性的免疫金银染色法（Immunogold—sliver staining, IGSS）。到了1986年Fritz等人在免疫金银法基础上成功地进行了彩色免疫金银染色，使得结果更加鲜艳夺目。胶体金技术逐渐得到完善和成熟，近１０年来此项技术得到了迅速发展和广泛应用。应用胶体金为标记物的免疫金染色（IGS）与免疫金银染色（IGSS）方法在光镜和电镜下可以单标记和双标记或多种标记同时观察细胞和组织结构，可以定性、定位以至定量研究。
二．金免疫技术基本原理
金免疫技术是一种以胶体金作为标记物的免疫标记技术，胶体金是指金微小粒子(1-100nm)分散在另一种物质中所形成的体系，通常指金微小粒子分散在溶液中所形成的金溶胶，用此金溶胶标记蛋白质(抗原、抗体或 SPA、SPG)，胶体金颗粒具有高电子密度的特性，故在金标蛋白的抗原抗体结合处，显微镜下可见黑褐色颗粒；当这些标记物在相应的标记处大量聚集时，可在载体膜上呈现肉眼可见红色或粉红色斑点，从而用于抗原或抗体物质的定位或定性。
三．金免疫技术应用及评价
金免疫技术方法学主要有金免疫组织化学染色技术和金免疫测定技术，前者包括免疫金（银）光镜染色技术和免疫金电镜染色技术；后者包括斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验等。
金免疫组织化学技术利用免疫的特异性、组织化学的可见性，借助光学显微镜或电子显微镜的显像放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原或抗体，可进行定性、定位、定量研究。金免疫技术的敏感性在标记免疫技术中较低，但应用免疫金（银）光镜染色技术，经银加强染色后，其敏感性增强，可与荧光免疫技术和酶免疫技术相当，因此广泛应用。此外，胶体金在光镜水平还可应用于单克隆抗体或抗血清检测细胞悬液或培养的单层细胞的膜表面抗原，检测培养的单层细胞内抗原，检测阻组织中或亚薄切片中的抗原。在电镜水平还可用于检测细胞悬液或单层培养细胞表面抗原，检测组织超薄切片中的抗原。此方法电镜水平应用比其他免疫电镜方法操作简单，检测速度快，对微细结构的影响也较少，同时还可双重标记或多重标记，但试剂质量要求高，背景非特异吸附干扰大。
金免疫测定技术以醋酸纤维素膜为固相载体，以免疫金为结合物，可肉眼观察判定，灵敏度高、简便、快速，可立等结果，除试剂盒外无需任何仪器设备，试剂稳定性好，其定性作用用于多种临床检测项目，但主要限于检测正常体液中不存在的物质以及正常含量极低而在特殊情况下异常升高的物质，比如HIV、甲胎蛋白、肝炎病毒、禽流感病毒等的检测。随着技术的革新，其应用范围越来越广，在医学临床与基础研究中及工农畜牧业等卫生监测方面都可见到此技术的应用，但目前还只限广泛用于定性或半定量初筛环节。
四．金免疫技术未来的展望
随着社会经济的迅猛发展，在生物、医学以及其他如工农牧林等领域都需要简便、快速、灵敏度高、准确度强以及经济的免疫检测手段，金免疫技术正迎合了这些特点，而且试剂盒的发明使用、批量生产和良好的质量控制都为其广泛应用做好了铺垫，其操作方便性甚至可以让非专业人员熟练应用，虽然目前其在灵敏度和应用范围上还有局限，但通过金免疫技术的不断改进，其应用前景非常乐观，而且代表着快速检测技术发展的一个主要方向，其未来的应用与经济效益大有可为。
参考文献
[1] 刘晓鸣. 浅谈HBsAg全血胶体金检测试纸条在手术急检中应用的体会.丹东医药 2007；3
[2] 黎明兰,徐顺请. 免疫学检验.人民卫生出版社 2006.p.172-180
[3] 吴刚,姜瞻梅,霍贵成. 胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用. 食品工业科技 2007；12:218
[4] 彭大鹏，胡思顺，华艳. 胶体金免疫层析试纸条法与血凝抑制试验、琼脂扩散法检测禽流感病毒抗体的比较.中国兽医学报 2007；7
[5] 赵春艳. 胶体金免疫层析法在乙型肝炎病毒表面抗原检测中的应用评价.实用医技杂志 2009；1：16-1
[6] 胡凤娟. 胶体金法筛查丙型肝炎抗体在街头献血车中的应用检验医学.检验医学 2007；22：4
[7]http://www.med126.com/edu/200712/18329.shtm免疫金技术发展简史
