培养细胞一代生存期

“ 一代”指细胞接种到分离再培养的所用的时间。与细胞倍增一代不是一个含义。在细胞一代中，细胞能倍增3～6次，经历三个阶段：

1. 潜伏期(latent phase) ：  

接种   经过  悬浮期(细胞质回缩,胞体呈圆球形)          贴壁。

初代培养细胞   经过     10～24小时或更多时间。

连续细胞系和癌细胞系      经过      10～30分钟              贴附。

贴附现象是一个非常复杂和受多种因素的影响。

影响细胞贴附：底物表面不干净，影响细胞贴附。

利于细胞贴附：底物表面带有阳性物质与特殊物质:

纤粘连蛋白(fibronectin FN)、

细胞表面蛋白(cell surface proteinCSP)

这些物质有的存在与细胞表面,有的来自血清。

潜伏期特点：

长短与细胞接种密度、种类、使用的培养基性质有关。

(1)细胞贴附后进入潜伏期,细胞无增殖。少见分裂相，细胞有运动活动。

(2)初代培养 细胞潜伏期约为24～96小时或更长，

连续细胞系和肿瘤细胞潜伏期约6～24小时。

(3)细胞接种密度大潜伏期短。

(4)细胞出现分裂相增多时，标志细胞进入指数增生期。

2．指数增生期(logarithmic growth phase)：

特点：细胞增殖最旺盛阶段,分裂相增多。

细胞分裂指数(mitotie index MI) ：

表示每1000个细胞中的分裂相数。

条件：分裂相数与细胞种类、培养成分、pH培养箱温度有关。

细胞分裂指数：

初代细胞：在0.1%～0.5%之间% ,

连续分裂细胞和肿瘤细胞：3 ～5%。

指数增生期是作为细胞一代活力最好的时期,是进行实验最好和最主要的阶段。

指数增生期持续3～5天，细胞数量增多后生长空间变小，细胞相互接触可连接成片。

正常细胞：细胞相互接触能抑制细胞运动，这种现象称为接触抑制(contact inhibition)。

肿瘤细胞：没有这种现象，可作为区别正常与肿瘤细胞的标志之一。当肿瘤细胞达到一定密度后向三维空间发展，使细胞发生堆积(piled up)。

由于细胞不断增殖分裂，细胞数量持续增多，培养液的营养成分减少，代谢产物增多，细胞受营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制(Density inhibition),导致细胞分裂停止。

3.停滞期(stagnate phase)

细胞量和密度达到饱和，细胞停滞增殖。表明细胞进入到停滞期,细胞数量持平，也称为平顶期(plateau）。

特点：细胞不增殖,有代谢活动。培养液中的营养已逐渐耗尽,代谢产物积累增多,pH降低，此时需要传代,否则细胞将会中毒,发生形态改变,细胞会从底物脱落死亡。

注意：

传代过晚将影响下一代细胞的生长,至少要再传  1～2代  ,通过换液淘汰死细胞和受损较轻的细胞。待细胞全部恢复后再用。